Terapia Génica y Tratamiento del Cáncer Gástrico

La eliminación de células tumorales puede llevarse a cabo mediante la terapia por compensación de mutaciones (corrección de genes supresores de tumor o inhibición de oncogenes activados); la terapia génica suicida (B) y la terapia oncolítica (infección de las células tumorales con un virus lítico).La terapia génica suicida incrementa la susceptibilidad del tumor a la quimioterapia mediante la expresión de un gen suicida con un virus de replicación selectiva que codifica una enzima capaz de catalizar la conversión de un profármaco no toxico en un metabolito tóxico potente y de corta duración con capacidad para difundir desde la célula tumoral en la que se produce y eliminar las células tumorales que la rodean (efecto bystander) tras la administración del profármaco, sin entrar en la circulación sistémica ni causar efectos secundarios. Los sistemas suicidas más utilizados son: el gen de la timidina-cinasa del virus Herpes simplex (HSV-tk), y como profármaco, el ganciclovir (deoxi-timidina).

Referencias Bibliográficas

Rodríguez J, Martínez L, Cruz N. Terapia Génica para el tratamiento del Cáncer. Rev Colomb Cancerol. 2014;18(1):27-40. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0123901514702227

Terapia Celular - Stem Cells en Cancer Gástrico 

Las células madre de cáncer (CSC) se han identificado como la célula inicial en la formación del cáncer. Grupos específicos de miARN exosomal para CSC gástricos que puedan potencialmente predecir qué pacientes tienen un alto riesgo de desarrollar cáncer gástrico (GC) con el fin de diagnosticarlo en una etapa temprana. La identificación de miRNAs de firma y análisis adicionales de las funciones de sus genes diana en este trabajo ofrece biomarcadores alternativos para el diagnóstico y su estudio ayudará con el desarrollo de terapias efectivas. Utilizando la inmunoterapia junto con los miRNAs (stem cells), radioterapia, quimioterapia, pueden reducir la enfermedad de manera no invasiva. Ensayos realizados en las células mesenquimales (MSC), han permitido definirlas como un medicamento destinado a terapia celular. Es importante estudiar el comportamiento de las distintas poblaciones de MSC con relación a nichos particulares y no generalizar su uso terapéutico.

Referencias Bibliográficas

Peng Z, Qi A, Huan W,  Ye S. MicroRNA expression profiling in exosomes derived from gastric cancer stem-like cells. Oncotarget, 2017, Vol. 8, (No. 55), pp: 93839-93855. Disponible en:  https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5706839/

Zhao Y, Feng F, Zhou YN. Stem cells in gastric cancer. 2015 Jan 7;21(1):112-23. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25574084

Guadix J. Zugaza J. Galvez P. Características, aplicaciones y perspectivas de las células madre mesenquimales en terapia celular. Med Clin (Barc). 2017. Disponible en:  https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0025775316306820

Tumé L. Cisneros C. SevillanoJ. Desregulación de microARN en el cáncer: un enfoque terapéutico y diagnóstico. Gaceta Mexicana de Oncología. 2016;15(5):298---304. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1665920116300803

Tumé L. Las células madre del cáncer como centro de investigación de la inmunoterapia. Rev Venez Oncol 2014;26(3):199-216. Disponible en: http://www.redalyc.org/html/3756/375633970005/

ADN Recombinante

En la Naturaleza

En los organismos procariotas existen tres mecanismos principales de transferencia genética horizontal: transformación natural, transducción y conjugación. Transformación es la capacidad que tienen las células procariotas competentes para adquirir fragmentos de ADN libre, presente de manera abundante en los suelos, las aguas etc. La incorporación de estos fragmentos de ADN es independiente de la secuencia. La transducción es la incorporación de material genético a una bacteria receptora, mediado por la infección de un virus bacteriófago (o fago) atemperado. Tras la infección de la célula bacteriana, el ADN del fago se integra en el cromosoma bacteriano. La conjugación es el proceso mediante el cual la información genética, transportada por un plásmido o un elemento integrado en el cromosoma (EIC) bacteriano, pasa de su célula recipiente original a una receptora que antes no lo contenía. Un ejemplo de la recombinación del ADN quienes realizan dichos mecanismos de manera natural son los plásmidos.

En el Cáncer Gástrico

La tecnología del ADN recombinante artificial el IFN y la IL4 son factores determinantes en de expresión tanto en gastritis crónica como en cáncer gástrico. Entonces bajo este estudio se obtuvieron biop­sias gástricas del sitio de lesión, una se utilizó para la identificación molecular de H. pylori (empleando oligonucleótidos) que amplifican una región de 522 pb del gen RNAr 16S de la bacteria y a la otra se le realizó inmunohistoquímica para observar la expresión de IFN-γ e IL-4 ( es una potente citocina anti-apoptótica, factor de supervivencia para las células tumorales) las cuales fueron incluidas en parafina después de la permeabilización y el bloqueo de la peroxidasa endógena; los cortes se in­cubaron durante 22 h con los anticuerpos monoclo­nales de ratón anti-IFN-γ y anti-IL-4 humano. Se realizó la extracción de DNA a par­tir de las biopsias gástricas, por el método de Trizol. Se cuantifi­có el DNA genómico en el biofotómetro, donde se determinó la concentración y pureza.

Referencias Bibliográficas

fbio.uh.cu [internet]. Recombinación den ADN. Universidad de Halabama facultad de biología. [Citado 10/12/2017] disponible en: http://fbio.uh.cu/sites/genmol/confs/conf5/index.htm

Alvarado, A. Clasificación de plásmidos por relaxasas. Universidad de Cantabria. [Citado 10/12/2017] disponible en: https://dialnet.unirioja.es/servlet/tesis?codigo=78560

Mora A, Villegas V, Atrisco J. IFN-γ, IL-4 y Helicobacter pylori en pacientes con gastritis crónica y cáncer gástrico. Vol. 24 [Citado 10/12/2017] disponible en: http://www.actauniversitaria.ugto.mx/index.php/acta/article/view/719

Microarray  y Cáncer Gástrico

Para poder identificar marcadores moleculares (perfil de expresión de ARNm) que distingan, condiciones premalignas como metaplasia y cáncer gástrico de gastritis. Se desarrolla un perfil de expresión a base de sangre con alta sensibilidad y especificidad para diferenciar a los pacientes “sanos” con gastritis, de aquellos con condiciones premalignas o malignas como cancer. Para lo cual el ARN que se extrajo de la sangre, se analizó usando una plataforma de microarrays que identificó cambios de expresión de ARN mensajero, lo que permitió diferenciar los diferentes casos. Las siguientes figuras representan árboles jerárquicos, también llamados mapas de calor, que permiten discriminar una patología de la otra con base en la expresión genética:

Referencia Bibliográfica:

Gómez M, Torres K. Falduto M. Identificación de biomarcadores sanguíneos para la detección de lesiones premalignas y el diagnóstico del cáncer gástrico. Revista Colombiana de Gastroenterología, vol. 32, núm. 1, enero-marzo, 2017, pp. 7-19. Disponible en: http://www.redalyc.org/pdf/3377/337750441002.pdf 

Prueba de PCR para Cáncer Gástrico

Tema: Detección de helicobacter pylori por PCR del gen 16s en biopsias gástricas colectadas en la ciudad de Bogotá: estudio preliminar

Objetivo: Identificar H. pylori mediante el empleo de la PCR de un segmento del gen 16S ARNr en ADN extraído a partir de biopsias gástricas de pacientes colombianos.

Tipo de muestras: biopsias gástricas

Transporte de muestra: Agar Columbia, adicionado con 7% de sangre desfibrinada de cordero, suplemento selectivo DENT (vancomicina, trimetoprim, anfotericina B y cefsulodin) e Isovitalex al 1%. Incubación en microaerofilia entre 2 a 7 días hasta observar colonias características en un ambiente: 5-10% O2; 5-10% CO2; 80-90% N2, humedad de 95% y temperatura de 37 °C.

En las colonias crecidas se le practicaron las pruebas básicas de identificación: coloración Gram, producción de ureasa, citocromo-oxidasa y catalasa (pruebas bioquímicas). Las muestras se cubrieron con un tapón de gasa y algodón para permitir el intercambio gaseoso. Incubación durante 4 días a 37°C.

Tipo de Ácido Nucleico: ADN genómico

Extracción: kit de extracción Ultra Clean microbial DNA isolation de MoBio®.

Gen a amplificar: gen DNAr16S de H. pylori cepa NCTC 11638

Tipo de PCR:  PCR convencional (16S ADNr)

Pasos:

1. Tubos de 100 μL utilizando volúmenes finales de 20 μL con las siguientes concentraciones:
2. Iniciadores (Sintetizados por BIONEER® 0,5 μM c/uno;
3. Taq polimerasa (Biolase®, Bioline®) 0,07 U/ μL
4. MgCl2, 2.0 mM
5. dNTPs 250 μM c/uno.
6. Buffer de reacción 1X
7. DNA cromosomal ~30ng.
8. Las condiciones de amplificación son las siguientes una denaturación inicial a 94°C por 4 minutos.
9. 30 ciclos de denaturación, anillaje y elongación a 94°, 56°C y 72°C respectivamente.
10. Tiempo final de extensión de 10 minutos a 72°C.
11. Se amplifica un segmentó del gen DNAr 16s de aproximadamente 395 pb.

Visualización: electroforesis en gel de agarosa al 0,8% en TAE y cuantificado en el equipo Qubit®.

Las técnicas moleculares como la PCR son de gran utilidad y eficacia en el análisis de la presencia específica de la infección. La sensibilidad de la reacción para la detección de H. pylori puede alcanzar el 100%, y su especificidad podría ser mayor que las pruebas serológicas

Referencias bibliográficas

Rojas S. Barragán C. Bayona M. Detección de helicobacter pylori por PCR del gen 16s en biopsias gástricas colectadas en la ciudad de Bogotá: estudio preliminar. MEDICINA (Bogotá)Vol. 37 No. 3 (110) Págs. 215-222. Disponible en: https://revistamedicina.net/ojsanm/index.php/Medicina/article/view/110-2/834

Prueba de Tamizaje y Prueba confirmatoria en el Adenocarcinoma Gastrico

Las pruebas de tamizaje son útiles para la detección temprana del cáncer gástrico, se ha logrado reducir en un 40 a 60% la mortalidad de esta patología. Estudios en Japón y Corea han mostrado que programas masivos de tamizaje disminuye la mortalidad, pero a muy alto costo. En la actualidad no existe un test de tamizaje no-invasivo para la detección de cáncer gástrico o de ADG en población general. Las pruebas se realizan a pacientes sintomáticos mayores de 40 años y la endoscopia digestiva alta (EDA) es el examen más escogido por excelencia. Otros medios pueden ser: Radiografías gástricas, Pruebas con marcadores tumorales: CA 19-9, Gastrina-17, Niveles de pepsinógeno I y II, Fotofluorografía,  Pruebas con bario, Anticuerpos para H. pylori. Dentro de las pruebas confirmatorias las cuales nos ayudarán a confirmar o no el cáncer es la utilización de una endoscopia alta, a la cual se la acompaña generalmente de una biopsia.

Referencias Bibliográficas

-Salas, D. Peiró, R. Evidencias sobre la prevención del cáncer. Rev Esp Sanid Penit 2013; 15: 66-75. Disponible en:

http://scielo.isciii.es/pdf/sanipe/v15n2/05_revision.pdf

-aecc.com [Internet]. España: Cáncer de estómago Diagnóstico; [actualizado 2 Junio 2017; citado 19 noviembre 2017]. Disponible en: https://www.aecc.es/SobreElCancer/CancerPorLocalizacion/cancerdeestomago/Paginas/diagnostico.aspx

Alteración Epigenómica en el Adenocarcinoma Gástrico

El cáncer gástrico tiene un origen multifactorial. En relación con las infecciones crónicas esta Neoplasia ha sido asociada a Helicobacter pylori y virus de Epstein- Barr (EBV). El cáncer de tipo difuso está asociado a herencia familiar. Los principales mecanismos de  la  epigenética  son:  a) la metilación del ADN  (hipo  e  hipermetilación);  b)  modificaciones de  histonas  y  remodelación de la estructura de la cromatina y c) los microARNs. La metilación del ADN controla la expresión de genes asociados a respuesta TH1 en particular asociado a la metilación del promotor de IFN-gamma. El H. pylori y sus cepas (cagA) se las asocia con respuesta inmune e inflamación de la mucosa gástrica, y en consecuencia puede evolucionar hacia lesiones premalignas más avanzadas.

Referencias Bibliográficas

Corvalá A. Maturana  M. Infecciones y alteraciones epigenéticas en cáncer. Rev Chil Pediatr. 2016;87(4):245---249. Disponible en:

http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0370-41062016000400002

Corvalán A. Bases epigenéticas del cáncer gástrico: oportunidades para la búsqueda de nuevos biomarcadores. Rev Med Chile 2013; 141: 1570-1577. Disponible en:

http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0034-98872013001200011&script=sci_arttext